本篇目录：
- 1、做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!
- 2、western印迹的步骤
- 3、westernblot实验步骤
- 4、westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
- 5、WesternBlot基本原理及步骤
做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!
一般是与转膜和显影的操作有关，转膜前尽量将膜平衡，并注意胶和膜之间避免气泡，显影时膜与X光片间也应避免气泡。
（1）配制一抗：按照一定比例稀释抗体，并将配好的抗体置于夹链袋中。（2）裁膜：将NC膜多余的部分裁去。
把一抗、洗涤和封闭的原因排除之后，仍然有整张膜发光，那就是发光液的质量问题。所以选择质量好的发光液关乎实验成败。
原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
大分子蛋白和小分子蛋白做western blot其实要求是一样的，区别就在于大分子蛋白跑得慢，所以电泳和转膜需要的电压或电流更大，时间更长，当然，一般大分子蛋白需要用低浓度胶，而小分子蛋白则选择高浓度胶。
western印迹的步骤
（1）转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。
这里提供一种：1）按厂商的使用指南用两块干净的玻璃，平板和0.75mm垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层，并固定在灌胶支架上。2）按表1配制分离胶液体并脱气，然后加入10%的过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌混匀。
蛋白样品的制备 配胶 根据蛋白的分子质量选择百分比不同的胶。（1）清洗胶板：用清水冲洗胶板，直至胶板表面没有任何污物。（2）验漏：将胶板安装在胶架上，向胶板内注满ddH2O，静置2min，观察是否渗漏。
按步骤9洗涤。 1加入抗生素蛋白-HRP(40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升 NGS)，于室温下摇动。 注意事项： western blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态，空间结构改变，因此那些识别空间表位的抗体不能用于western blot检测。
westernblot实验步骤
western blot实验操作步骤如下： 准备样品 1）制冰，准备冰盒。2）配制细胞裂解液：根据细胞数量确定所需裂解液：50ul/六孔板一孔 。
（1）转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。
WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
ECL Western特异发光检测试剂盒用于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸检测。下面以engreen的超敏型ECL发光液Enlight-Plus为例，说一下检测实验步骤。 常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。
western blot的实验步骤及注意事项的资料 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。
做好Western需要注意各种细节。工欲善其事，必先利其器，首先还是从蛋白提取开始谈起。 收样前3min先配制细胞裂解液(现配现用)，RIPA：蛋白酶抑制剂：磷酸酶抑制剂=99：1：1。6孔板收集蛋白每孔需200ul，计算用量。
westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
1、用微型台式真空泵吸尽洗涤液，加入Western封闭液，在摇床上缓慢摇动，室温封闭60分钟。对于一些背景较高的抗体，可以在 4℃ 封闭过夜。
2、（1）清洗胶板：用清水冲洗胶板，直至胶板表面没有任何污物。（2）验漏：将胶板安装在胶架上，向胶板内注满ddH2O，静置2min，观察是否渗漏。如果渗漏，重新装配胶板胶架。
3、（3）将膜置于TBST中清洗，置于汉恒生物丽春红染液中，置于摇床摇动3—5分钟。
4、western blot详细步骤如下：蛋白样品制备（组织中总蛋白的提取）第一步：敲取0.07-0.1g组织+400-500ul裂解液，放入打样管，放入打样机打样。
5、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
WesternBlot基本原理及步骤
WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
操作步骤 （一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13，000g离心15min。取上清液作为样品。
原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体结合。
western blot详细步骤如下：蛋白样品制备（组织中总蛋白的提取）第一步：敲取0.07-0.1g组织+400-500ul裂解液，放入打样管，放入打样机打样。
到此，以上就是小编对于western fiction的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
